動(dòng)物ELISA試劑盒操作步驟如下

 　　動(dòng)物ELISA試劑盒是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。以這些特點(diǎn)在上得到了廣泛的應(yīng)用，由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。廣泛用于定量檢測(cè)各種分子，包括細(xì)胞因子，趨化因子，生長(zhǎng)因子和蛋白酶等。
　　
　　動(dòng)物ELISA試劑盒操作步驟如下：
　　一、樣品準(zhǔn)備：
　　1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。
　　2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋?zhuān)ㄈ?μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
　　3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
　　
　　二、檢驗(yàn)方法：
　　1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
　　2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
　　3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
　　4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
　　5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
　　6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
　　7.洗滌，同步驟5。
　　8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
　　9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。